中東呼吸綜合征冠狀病毒感染的常規(guī)檢測(cè)方法是通過(guò)實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)和測(cè)序鑒定。有適當(dāng)經(jīng)驗(yàn)和生物安全條件的實(shí)驗(yàn)室可以嘗試用細(xì)胞分離病毒檢測(cè),但不屬于常規(guī)檢測(cè),本指南中未包含病毒分離的步驟。此外,鑒于我國(guó)尚無(wú)中東呼吸綜合征冠狀病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株和血清學(xué)檢測(cè)試劑,此版技術(shù)指南暫不包括血清學(xué)檢測(cè)內(nèi)容。
任何中東呼吸綜合征冠狀病毒的檢測(cè)都必須在適當(dāng)條件的實(shí)驗(yàn)室由經(jīng)過(guò)相關(guān)技術(shù)安全培訓(xùn)的人員進(jìn)行操作。
目前病毒核酸的檢測(cè)方法主要有檢測(cè)E蛋白上游基因(upE)、ORF1b基因和ORF1a基因三種。這些方法均高度敏感,檢測(cè)ORF1b基因的方法不如針對(duì)ORF1a的方法敏感,但比其更加特異。另外,已確定了中東呼吸綜合征冠狀病毒基因組中位于RNA依賴(lài)的RNA聚合酶(RdRp)和衣殼蛋白(N)基因的幾個(gè)適合測(cè)序驗(yàn)證的靶序列。
在實(shí)驗(yàn)室要確認(rèn)一個(gè)樣本為陽(yáng)性,需要滿(mǎn)足以下兩個(gè)條件的其中
一個(gè):
(一)至少兩種中東呼吸綜合征冠狀病毒特異性PCR結(jié)果陽(yáng)性;
(二)一種PCR結(jié)果為陽(yáng)性,另外一種PCR產(chǎn)物序列測(cè)序,與已知序列相符。
當(dāng)針對(duì)中東呼吸綜合征冠狀病毒的兩種不同的檢測(cè)方法結(jié)果不一致的時(shí)候,應(yīng)當(dāng)采用反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序以確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果。
陰性結(jié)果也不能排除臨床病人的感染,一些因素可能產(chǎn)生假陰性,包括:樣本質(zhì)量差,比如口咽等部位的呼吸道樣本;樣本收集的過(guò)早或過(guò)晚;沒(méi)有正確的保存、運(yùn)輸和處理樣本;技術(shù)本身存在的原因,如;病毒變異,PCR抑制等。